ELISA kit er baseret på fast fase af antigen eller antistof og enzymmærkning af antigen eller antistof. Antigenet eller antistoffet bundet til overfladen af den faste bærer bevarer stadig sin immunologiske aktivitet, og det enzymmærkede antigen eller antistof bevarer både sin immunologiske aktivitet og enzymaktiviteten. På bestemmelsestidspunktet reagerer prøven under test (hvor antistoffet eller antigenet måles) med antigenet eller antistoffet på overfladen af den faste bærer. Antigen-antistofkomplekset dannet på den faste bærer adskilles fra andre stoffer i væsken ved vask.
Enzymmærkede antigener eller antistoffer tilsættes, som også binder til den faste bærer ved reaktion. På dette tidspunkt er mængden af enzym i den faste fase i forhold til mængden af stof i prøven. Efter tilsætning af substratet for enzymreaktionen katalyseres substratet af enzymet til at blive farvede produkter. Mængden af produktet er direkte relateret til mængden af det testede stof i prøven, så kvalitativ eller kvantitativ analyse kan udføres i henhold til farvens dybde.
Den høje katalytiske effektivitet af enzymer forstærker indirekte resultaterne af immunresponset, hvilket gør analysen meget følsom. ELISA kan bruges til at bestemme antigener, men kan også bruges til at bestemme antistoffer.
Grundlæggende principper for ELISA kit
Den bruger specifik reaktion af antigen og antistof til at forbinde objektet med enzymet og producerer derefter farvereaktion mellem enzym og substrat til kvantitativ bestemmelse. Målingen kan være antistof eller antigen.
Der er tre reagenser nødvendige i denne bestemmelsesmetode:
â Fastfase antigen eller antistof (immun adsorbent)
â¡ Enzymmærket antigen eller antistof (markør)
⢠substrat til enzymvirkning (farveudviklingsmiddel)
I målingen bindes antigenet (antistoffet) først til den faste bærer, men bevarer stadig sin immunaktivitet, og derefter tilsættes et konjugat (markør) af antistof (antigen) og enzym, som stadig bevarer sin oprindelige immunaktivitet og enzym. aktivitet. Når konjugatet reagerer med antigenet (antistoffet) på den faste bærer, tilsættes det tilsvarende substrat for enzymet. Det vil sige katalytisk hydrolyse eller REDOX reaktion og farve.
Farvetonen, den producerer, er proportional med mængden af antigen (antistof), der skal måles. Dette farvede produkt kan observeres med det blotte øje, optisk mikroskop, elektronmikroskop, kan også måles med spektrofotometer (enzymmærkningsinstrument). Metoden er enkel, bekvem, hurtig og specifik.